High-Level Production of MMLV Reverse Transcriptase Enzyme in Escherichia Coli
Yazarlar (3)
Alanya Alaaddin Keykubat Üniversitesi, Türkiye
Türkiye
Prof. Dr. İsa GÖKÇE
Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi, Türkiye
| Makale Türü |
Özgün Makale
|
| Makale Alt Türü | Ulusal alan endekslerinde (TR Dizin, ULAKBİM) yayınlanan tam makale |
| Dergi Adı | International journal of advances in engineering and pure sciences (Online) |
| Dergi ISSN | 2636-8277 |
| Dergi Tarandığı Indeksler | TR DİZİN |
| Makale Dili | İngilizce |
| Basım Tarihi | 12-2021 |
| Cilt No | 33 |
| Sayı | 4 |
| Sayfalar | 549 / 555 |
| DOI Numarası | 10.7240/jeps.877806 |
| Makale Linki | https://dergipark.org.tr/tr/pub/jeps |
| Özet |
| Moloney murin lösemi virüs (MMLV) ters transkriptazı (RT), cDNA sentezi ve RNA amplifikasyonu için en yaygın kullanılan enzimdir. Bu çalışmada moleküler çalışmalardaki önemi nedeniyle MMLV RT enziminin rekombinant olarak üretilmesi amaçlanmıştır. Bu bağlamda, MMLV RT enzimini kodlayan DNA fragmanı pTOLT plazmidine klonlanmış ve E. coli BL21 (DE3) pLysE hücrelerinde eksprese edilmiştir. Proteinin yüksek düzeyde ekspresyonu, protein moleküllerinin inklüzyon cisimciklerinde toplanmasına neden olduğundan MMLV RT proteininin çözünür formda elde edilebilmesi için MMLV RT ve şaperon plazmidlerin (pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pGTf2, pTf16) birlikte ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Beklentilerimizin aksine, protein çözünür formda elde edilemediği için, yeniden katlama prosesi kullanılarak inklüzyon cisimciklerinden geri kazanılmıştır. Son olarak protein, afinite kromatografisiyle saflaştırılmış ve proteinin aktivitesi RT-PCR tekniği kullanılarak kontrol edilmiştir. |
| Anahtar Kelimeler |
| Moloney murine leukemia virus | Inclusion bodies | Reverse transcriptase | cDNA synthesis |
BM Sürdürülebilir Kalkınma Amaçları
| Atıf Sayıları | |
| TRDizin | 2 |