Endüstriyel kullanım amaçlı ksilanaz enziminin rekombinant olarak üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Tez Türü Doktora
Ülke Türkiye
Üniversite Gaziosmanpaşa Üniversitesi
Enstitü Fen Bilimleri Enstitüsü
Anabilim Dalı Kimya Ana Bilim Dalı
Tez Onay Yılı 2013
Öğrenci Adı ve Soyadı Sema BİLGİN
Tez Danışmanı PROF. DR. İSA GÖKÇE
Türkçe Özet Hemiselüloz, bitki hücrelerinin çeperlerinde selüloz ve pektinlerle birlikte bulunan bazı karmaşık karbohidrat ya da polisakaritlerin ortak adıdır. Ksilan, hemiselülozun başlıca bileşenidir. Ksilanın iskelet yapısı, ß-1,4-glikozit bağlarıyla bağlanmış ksiloz rezidülerinden oluşur. Ksilanı hidroliz eden enzimlerin tamamına ksilanolitik enzim sistemi adı verilir. Bu gurupta ß-1,4-Endoksilanaz, ß-Ksilozidaz, ß-L-araninofuranozidaz, ß-Glukuronidaz, Asetil ksilan esteraz ve Fenolik asit (Ferulik ve p-Kumarik asit) esteraz yer almaktadır. Ksilanaz, kağıt ve kağıt hamuru başta olmak üzere gıda ve hayvan yemi endüstrisi gibi alanlarda temel endüstriyel enzim olarak çok büyük öneme sahiptir. Bu çalışmada ksilanaz (endo-1,4-ß-ksilanaz) enziminin rekombinant olarak üretimi hedeflenmiştir. Ksilanaz üreticisi mikroorganizmalar topraktan izole edilerek moleküler tanılaması yapılmıştır. Asidik ortamda ksilanaz aktivitesi gösteren Bacillus subtilis suşundan izole edilen ksilanaz enzimini kodlayan gen (xyn) , pET28b vektör sistemine klonlanmış ve ekspresyon amacıyla E.coli BL21(DE3) pLysE hücrelerine transfer edilmiştir. Böylece ksilanaz enzimi rekombinant olarak üretilmiştir. Üretilen enzim aktivite göstermiş, optimum sıcaklığı 60 °C, optimum pH?sı ise 6,0 olarak bulunmuştır.Anahtar kelimeler: Ksilanaz, Ksilan, Rekombinant enzim, E. coli
İlgilizce Özet Hemicellulose is common name of complicated carbohydrates and polysaccharides exist with celluloses and pectines in plant cell walls. Xylan is main component of hemicellulose. Xylan?s backbone comprises xylose residues linked by ß-1,4-glycosidic bonds. All of the enzymes that hydrolise xylan called as xylanolytic enzyme systems. ß-1,4-endoxylanase, ß-xylosidase, ß-L-araninofuranosidase, ß-glucuronidase, acetyl xylan esterase and fenolic acid (ferulic ve p-coumaric acid) esterase are in this group. Xylanase has a big importance as main industrial enzyme in paper manufacturing, food and animal feed industuries. In this study it is aimed that production of recombinant xylanase (endo-1,4-ß-xylanase). Molecular identification of xylanase producer microorganisms isolated from soil was made. xyn gene is isolated from Bacillus subtilis strain wihch has xylanase activity in the acidic medium, it is cloned pET28b vector system and then transformed to BL21(DE3) pLysE cells for expression of protein. Thus, xylanase enzyme was produced as a recombinant. The enzyme poduced was active and it is found that optimum temprature and optimum pH of enzyme are 60 °C and 6,0 respectively.Keywords: Xylanase, Xylan, Recombinant enzyme, E. coli

Paylaş